Gram´i värvimine

Antud värvimismeetod põhineb bakteriraku seina ehitusel. Selle  järgi jagunevad bakterid kahte gruppi: grampositiivsed ja -negatiivsed.

Gram´i värvimise esimeses etapis toimub bakterpreparaadi värvimine aluselise kristallvioletiga. Edasi töödeldakse preparaati Lugoli lahusega, mille ülesandeks on kinnistada kristallviolett grampositiivsete bakterite peptidoglükaani kihtidesse. Selle tulemusena moodustub grampositiivsetes bakterites kristallviolett-joodi kompleks.  Seejärel toimub preparaadi värvitustamine, pestes seda etanooliga. See etapp toob esile erinevad astmed Gram´i värvimisel. Nimelt grampositiivsed bakterid hoiavad kristallvioletti tänu paljudele peptidoglükaani kihtidele kinni ja jäävad seega violetseteks (sinisteks). Samas gramnegatiivsed bakterid muutuvad värvituks, kuna nendel on peptidoglükaani kihte oluliselt vähem (Joonis 3). Nende bakterite esile toomiseks toimub järelvärvimine safraniiniga. Selle tulemusena värvuvad gramnegatiivsed bakterid punasteks (roosadeks). Grampositiivsed bakterid jäävad violetseteks.

Bakterite Gram´i järgi värvimise etapid

  1. Puhtale ja kuivale alusklaasile kantakse steriilse külviaasaga (kas veetilka või otse) uuritav materjal.
  2. Mikroobne materjal levitatakse õhukese kihina alusklaasil ning seejärel steriliseeritakse uuesti külviaas.
  3. Leeklambi leegi läheduses alusklaasil oleva materjali kuivatamine.
  4. Materjali jahutamine.
  5. Preparaadi värvimine kristallvioletiga (hoideaeg 1-2 min).
  6. Preparaadi pesemine destilleeritud veega.
  7. Preparaadile lisatakse mõned tilgad Lugoli lahust (hoideaeg 1-2 min).
  8. Preparaadi loputamine destilleeritud veega.
  9. Preparaadi töötlemine etüülalkoholiga ja kohene loputamine destilleeritud veega.
  10. Preparaadi värvimine safraniiniga (hoideaeg 1-2 min).
  11. Preparaadi loputamine destilleeritud veega.
  12. Preparaadi kuivatamine filterpageriga.
  13. Immersioonõli lisamine.
  14. Mikroskopeerimine.

Video Gram´i värvimisest

    Video Gram-positiivsetest bakteritest




Kontrollküsimus!

Küsimus: Mis värvi värvuvad Gram-negatiivsed bakterid?

Free JavaScripts provided
by
The JavaScript Source

<< Tagasi
/ Järgmine leht >>